传递窗紫外灯表面消毒效果验证

一粒尘埃
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  1、概述 进入微生物室的物品通过传递窗,经过紫外消毒后进入微生物室。为了确认传递窗 紫外灯的消毒效果,特起草本方案对其进行验证。本验证用于 QC 微生物室、无菌 室传递窗紫外灯表面消毒效果检查。 2、实施日期及时间安排 2012 年 月 日开始进行验证。 3、验证小组成员 QA 负责验证方案的批准 QA 负责验证方案的批准 QC 负责验证方案、验证报告的审核、组织验证方案 的培训和实施 负责验证方案和验证报告的起草 验证方案的实施 4、仪器和设备 仪器名称 型号或规格 净化工作台 HS-1300-V 型 菌落计数器 紫外线强度测定仪 稳压器 220V 细菌培养箱 SHP-150 型 霉菌培养箱 GNP-9270 型 5、器材 5.1 灭菌刻度吸管(1ml,10ml) 5.2 灭菌试管 5.3 灭菌平皿 5.4 酒精灯 5.5 载体:(1.0×1.0cm 的玻片) 传递窗紫外灯表面消毒效果验证 第 5 页 共 9 页 6、材料与试剂 6.1 纯化水 6.2 营养琼脂培养基 6.3 改良马丁琼脂培养基 6.4 营养肉汤培养基 6.5 改良马丁培养基 6.6 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003] 6.7 枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501] 6.8 大肠杆菌[CMCC(B)44 102] 6.9 白色念珠菌[CMCC(F)98 001] 6.10 稀释液(0.1%吐温 80,0.1%蛋白胨溶液) 7、验证过程 7.1 试验环境 试验在洁净度 10 000 级下的局部洁净度 100 级的单向流空气区域内进行,全过程 严格遵守无菌操作。单向流空气区、工作台面及环境定期按《医药工业洁净室(区) 悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 每次操作开始前,开紫外灯照射 1 小时。 7.2 培养基的制备 7.2.1 营养琼脂培养基 配方: 营养琼脂培养基粉 31.0g 纯化水 1000ml 配制: 根据需要量称取营养琼脂培养基粉置适宜容器中,按配方比例加入纯化水,水浴 加热使溶解,调 pH 至 7.1±0.2,分装于适宜容器,置高压灭菌器灭菌 121℃×15 分钟。 7.2.2 改良马丁琼脂培养基 传递窗紫外灯表面消毒效果验证 第 6 页 共 9 页 配方: 改良马丁琼脂培养基粉 42.0g 纯化水 1000ml 配制: 根据需要量称取改良马丁琼脂培养基粉,按配方比例加入纯化水,水浴加热使溶 解,调 pH 至 6.4±0.2,分装于适宜容器,置高压灭菌器灭菌 115℃×20 分钟。 7.2.3 营养肉汤培养基 配方: 营养肉汤培养基 20g 纯化水 1000ml 配制: 称取营养肉汤培养基 20 克,加 1000ml 纯化水,加热溶解,加热至沸,冷却至常 温,分装于适宜容器,置高压灭菌器灭菌 121℃×15 分钟。 7.2.4 改良马丁培养基 配方: 改良马丁培养基粉 28.0g 纯化水 1000ml 配制: 根据需要量称取改良马丁培养基粉,按配方比例加入纯化水,水浴加热使溶解, 调 pH 至 6.4±0.2,分装于适宜容器,置高压灭菌器灭菌 115℃×20 分钟。 7.4 方法验证试验 7.4.1 辐照强度测定 7.4.1.1 开启紫外灯 5min 后,用中心波长为 253.7nm 的紫外线强度测定仪在灯管下方 垂直 1m 的中心处测量其辐照度值(uW/cm2)。 7.4.1.2 测量时,电压应稳定在 220V。 7.4.1.3 普通型或低臭氧型直管紫外线灯(30W),在灯管下方垂直 1m 的中心处,新灯 管的辐照度值应≥90 uW/cm2 。使用中的灯管的辐照度值应≥70 uW/cm2 ,低 传递窗紫外灯表面消毒效果验证 第 7 页 共 9 页 于此值者应予更换。 7.4.2 照射剂量 表面消毒接受的照射剂量,应达杀灭目标微生物所需。对大肠杆菌,照射剂量应达 到 7.5×103 uW·s/cm2,对金黄色葡萄球、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌应达到 2.53× 104uW·s/cm2。 7.4.2.2 照射剂量计算: 照射剂量(uW·s/cm2 )=紫外灯管强度(uW/cm2)×时间(s) 7.4.3 细菌及其芽孢和真菌杀灭效果的测定 7.4.3.1 菌液的制备 接种菌种名称 接种培养基 培养条件 金黄色葡萄球菌新鲜培养 物 营养肉汤培养基 30~35℃培养 18~24 小 时 大肠杆菌新鲜培养物 枯草芽孢杆菌新鲜培养物 白色念珠菌新鲜培养物 改良马丁培养基 23~28℃培养 24~48 小 时 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌培养后,将菌液进行活菌计数。 7.4.3.2 将灭菌载体平放于灭菌平皿内,每个载体滴注定量菌悬液,(载体回收菌量达 5 ×105~5×106 cfu/片),涂匀,放 37℃培养箱烘干。开启紫外灯 5min 后,将 16 个染菌玻片平放于灭菌平皿内,水平放于适当距离照射,于 4 个不同间隔时间 (15min、30 min、45 min、60 min)各取出 4 个染菌玻片,分别投入 4 个盛有 5ml 洗脱液试管中,振打 80 次。 7.4.3.3 经适当稀释后,取 1ml 洗脱液,作平板倾注,每个染菌玻片接种两个,细菌放 30~35℃培养 48 小时作活菌计数,真菌放 23~28℃培养 72 小时作活菌计数。 7.4.3.4 阳性对照,除不做照射处理外,取 4 个染菌玻片,分别投入 4 个盛有 5ml 洗脱 液试管中,振打 80 次。余按 7.4.2.3 同样操作。 7.4.3.5 计算杀灭率 阳性对照回收菌数-试验组回收菌数 传递窗紫外灯表面消毒效果验证 第 8 页 共 9 页 杀灭率(%)= ×100% 阳性对照回收菌数 7.4.3.6 判定标准 对指示菌杀灭率≥99.9%判为消毒合格。 8、验证结果记录: 附件 1. 试验菌数量测定原始记录 8、再验证周期 传递窗构造或紫外灯管放置位置发生改变时。 9、相关 SOP 文件编号 文件名称 020141 微生物实验室管理 020143 物品进出微生物检验室 020342 微生物检验区的清洁消毒 020343 培养基的配制 020344 细菌的接种、传代和保存 020377 高压灭菌 021267 微生物数量的测定 10、QA 职责 QA 必须参与验证的评审阶段; QA 必须审阅最终报告(包括草案); QA 审阅者不应是参与实施的其他 QA 人员。 11、修改事项 在实施过程中,如果方案需要修改,必须提交书面的报告,阐述修改的原因,修改的内 容,并经过验证小组负责人及 QA 的认可。修改后的方案同先前执行的方案一起归档。 12、文档 所有的相关文档都应该保留至少 5 年,这些文档应包括如下内容: 原始方案、修改后的方案(如果有的话)、偏差报告、原始数据、原始报告和最终报告、 其中,报告应该包括以下内容: 传递窗紫外灯表面消毒效果验证   

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发布于 2024-02-21 09:37

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