欧盟和中国 GMP对臭氧消毒验证没有具体要求；中国GMP指南，无菌药品中仅描述为：对于空调管道、设备间隙等洁净区内卫生死角的微生物污染，必要时可采用臭氧等熏蒸的方法，同时应该建立监测熏蒸剂残留水平的方法并进行验证，以及制定日常监测规程和方法。

臭氧消毒验证周期法规上没有规定，可结合法规关于相应洁净级别的环境要求与企业累积的日常消毒效果数据进行风险评估以确定再验证周期。

臭氧消毒的验证中需进行臭氧浓度和消毒效果确认（生物指示剂挑战性试验中含菌量为105 ~ 106 和103 的菌条灭菌后，应能够降低3个对数单位）。首次验证中还应包括熏蒸剂残留水平的方法验证。

多区域或同区域多次验证的结果一致性不太好保证，所以，不推荐强制做三个周期。

臭氧是一种广谱杀菌剂，它与微生物细胞中多种成分产生反应，从而产生不可逆转的变化而灭亡。可杀灭细菌繁殖体和芽胞、病毒、真菌等，并可破坏肉毒杆菌毒素。

臭氧消毒是利用HVAC系统的循环风作为臭氧的载体，即将臭氧发生器生产的臭氧由HVAC系统中的净化风机产生的压力风源，扩散至整个洁净区域，并使空气中的臭氧浓度均匀，即可达到灭菌目的。

空气消毒：在《医疗机构消毒技术规范》中有如下描述“对空气消毒应在封闭空间，室内无人的条件下进行，臭氧浓度大于等于20mg/m³，作用时间大于等于30min 。

根据制药行业实际的应用经验，不同洁净级别的洁净室消毒通常采用如下臭氧浓度：

Ø  D级=10ppm=20 mg/m³

Ø  C级=15ppm=30 mg/m³

Ø  B级=20ppm=40 mg/m³

一般情况下，熏蒸时间以达到臭氧浓度后开始计时再熏蒸60分钟室内空气中允许臭氧浓度为0.16 mg/m³。

环境消毒周期的确定消毒效果的验证必须能够证明一个选定物体(建筑、设备、空气等)的微生物数量在一定的条件下持续减少或杀灭。因此须从生物负载预研究和选择消毒剂开始，然后着眼于研究对消毒方法的评估和数据收集分析来决定效果和重现性，因此消毒周期的确定也必须通过验证来达到。

多种因素可影响臭氧的杀菌作用，考虑到臭氧消毒仅仅是用来控制空间微生物负荷的，而且受影响因素比较多（如环境温度、相对湿度、臭氧浓度、微生物负荷、洁净室或设备表面其它有机物影响等），多区域或同区域多次验证的结果一致性不太好保证，所以，不推荐强制做三个周期。当然，如果企业需要积累消毒经验数据，为质量管理提供支持，应该多次执行。

参考：

消毒技术规范，附录C，2012

中国GMP2010年版指南