K-B法药敏试验的注意事项主要有：
①K-B法所用琼脂为标准的M-H琼脂，该琼脂具有以下几个特点：琼脂成分以及pH水平得到了严格的控制；M-H琼脂上同一抗菌药对同一株细菌的抑菌圈直径有很好的可重复性结果；基本不含有抑制磺胺类药物和四环素类药物抗菌活性的物质；可满足绝大多数细菌的生长需要；目前已有的大量文献资料中药敏试验所用的培养基均为M-H琼脂。
②抗菌药纸片间的距离不能小于24mm，150mm直径的平皿上所贴纸片不多于12张（苛养菌要求贴9张），90mm的平皿上不能多于6张。纸片一旦接触琼脂表面就不能再掀起贴于其他位置，因为某些药物可在瞬间就扩散至琼脂中。
③阅读结果时需要有反射光，某些特殊的耐药机制检测要用透射光，如苯唑西林或头孢西丁检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS），阅读万古霉素的抑菌圈直径等。
④为保证每次试验结果准确可靠，应定期用标准菌株作为对照菌，与受试菌同时进行试验。如测葡萄球菌药敏时，用金黄色葡萄球菌ATCC 25923为对照；测革兰阴性杆菌药敏时用大肠埃希菌ATCC 25922作对照；测假单胞菌药敏时用铜绿假单胞菌ATCC 27853为对照菌以控制药敏试验的质量，评价其结果的可靠性。
