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先将保藏的已知菌株传代，次日挑取处于对数生长期的纯菌制备目标菌悬液，起始浊度为0.5McF。稀释104倍备用。用临床标本制备干扰物，例如消化后的痰液、正常粪便混悬液、脓液（过于稠厚的需稀释10倍）等。由于尿液中干扰菌太少，一般不选用尿液做干扰物。取1ml干扰物，加入0.1ml稀释后的目标菌悬液。混匀后立即采用分区划线法接种，不加目标菌悬液的标本用作对照。通常随机抽取临床标本用作干扰物，每次采用10份临床标本即可。可将多种不同的待测目标菌加入同一份干扰物中进行试验。一般来说，选择干扰标本的原则是目标菌属于该类型标本中的常见菌，例如肺炎链球菌、流感杆菌常分离自痰液，所以就采用痰液作为干扰标本；志贺菌、沙门菌常分离自粪便，因而粪便就是沙门菌和志贺菌的干扰标本；而淋球菌常常分离自白带、脓液，所以可以选用白带和脓液作为干扰标本。 过夜培养后取出，仔细观察目标菌在培养基上是否出现，必要时延长培养时间。统计接种的10份干扰标本中目标菌的分离情况：例如，10份痰液中，加入肺炎链球菌后有7份分离到肺炎链球菌，而对照无分离，那么回收率就是70%。可以看出，回收率越接近100%，说明培养基分离效果越好，越低则分离效果越差。
