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对滤膜孔径进行实验验证,一般有气泡法、水流量法和细菌截留法三种。
1、气泡法
先将滤膜浸入水中,使完全湿润,然后用镊子夹住一片滤膜放于气泡点测定装置或滤膜孔径测定仪上,膜上放一块与滤膜大小相同的尼龙筛网,再加上多孔板,将螺旋固定圈旋紧,在多孔板上加3~5mm 深的水(注意排除气泡)关闭放气阀,启动空压机或氮气瓶阀,使压力缓缓上升,注意观察水面上产生第一个气泡时,记录压力表的压力,气泡点压力不应小于2.2kg/cm2(0.2MPa)。
2、水流量法
将滤膜装于除菌滤器上,开动真空泵,压力在700mmHg(93kPa)下,抽滤已滤清的水约500ml,计算出每1分钟的滤速。建议在700mmHg(93kPa)压力下,滤膜直径47mm;流速55~75ml/min。
3、细菌截留法
常用的细菌为黏质沙雷菌(Serratia marcescens)(CMCC(B)41002),将该菌的新鲜培养物接种于营养肉汤培养基中,30~35℃,培养18~24小时,用无菌0.9%氯化钠溶液稀释至不少于107cfu/ml的菌悬液,取此菌液,按滤膜面积每1cm2不少于1ml加至无菌0.9%氯化钠溶液中,按薄膜过滤法过滤,收集全部滤液接种于胰酪大豆胨液体培养基(TSB)中(滤液体积不得大于培养基体积的10%),30~35℃培养24~48小时,应无菌生长。