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抑制细胞生长,提高蛋白表达稳定性、高浓度筛选压力导致变异
√抑制细胞生长 筛选压力能部分抑制细胞的生存能力。
√提高蛋白表达稳定性 添加筛选压力能提高蛋白生产率,同时保持蛋白质质量属性和细胞系稳定性。例如:DHFR是催化二氢叶酸还原成四氢叶酸的酶,四氢叶酸是甘氨酸、胸苷一磷酸和嘌呤生物合成所必需的前体。氨甲喋呤(MTX)是叶酸的类似物,可以与DHFR结合并抑制其活性。从而使细胞在缺乏胸苷和嘌呤的培养基中死亡。当细胞在MTX的压力下生长时,只有DHFR基因扩增并高效表达的群体才能存活下来。随着MTX浓度的升高,存活下来的细胞DHFR扩增程度越高。能耐受高浓度MTX压力的细胞,可能含有几千个拷贝的DHFR基因。
√高浓度筛选压力导致变异 在极高的筛选压力浓度(如100-1000μM)下逐渐培养细胞,可能导致靶基因变异,并可能对细胞克隆性和稳定性造成风险。