1
关注
1073
浏览

采用有限稀释进行单克隆铺板的原理是什么?

您还未登录!暂时最多只可查看 1 条回答

登录! 还没有账号?去注册

ki1314520 二阶会员 用户来自于: 广东省深圳市
2023-10-18 22:59

01 有限稀释法是传统的挑选单克隆的方法,该方法操作简单,对仪器设备的需求比较少,并且方便与成像系统关联使用,因此是目前应用较多的单克隆挑选方法;其缺点是效率比较低,需要在大量的96/384孔板中进行挑选才有可能获得理想的克隆(一般认为在不低于1000个克隆中挑选)。有限稀释法对人工依赖比较高,不同操作人员的操作习惯差异会影响实验结果,并且不同公司或硏究机构在细胞株、单克隆培养基等方面存在的差异同样会带来实验结果的差异,因此计划使用该方法的科研机构或公司,需要建立自己的平台方法,同时使用固定的操作人员来减少误差,如果条件允许可以使用设备对工程细胞进行有限稀释的操作。

02 有限稀释法很难给出一个通用的单克隆形成率,但是可以肯定的是在不借助成像设备的情况下,只做1轮有限稀释很难确定所选细胞是单克隆。如果想获得高的单克隆率,一般认为至少需要2轮以上有限稀释,稀释比率在0.3-0.8/孔。对于有限稀释法来说,不同生物公司或硏究机构在细胞株和单克隆培养基等方面存在差异,这些差异直接影响了单克隆成活率(有多少单细胞能长成群落),加上细胞之间可能存在的相互作用(如趋向于结团等),显然单纯使用泊松分布计算单克隆概率是不够的。笔者认为对于不同实验室来说,具体需要做几轮有限稀释和使用多大的稀释比例需要根据该实验室具体情况通过实验来确定。

关于作者

问题动态

发布时间
2023-10-18 22:58
更新时间
2023-10-18 22:59
关注人数
1 人关注

相关问题

生物学试验中试验动物的选择是否一定是需要采用双性别(器械本身不区分性别使用)?
第二类无源医疗器械申报首次注册时,注册人应提供哪些材料进行生物相容性评价?
口腔医疗器械生物学评价应参考什么标准进行?
某产品具有均属于《免于进行临床试验医疗器械目录》的多种适用范围,在产品注册时应如何提供临床评价资料
我公司已对物料的供应商进行审计,是否可直接采用供应商报告作为物料的放行依据(鉴别项自己做)?
产品进行电气安全整改是否会影响电磁兼容检验结果,若有,哪些整改措施会有影响?
如果注射用水不采用70℃以上保温循环,应如何证明其可行性?用验证可以吗?是否通过21天的验证证明其在常温下循环,且水质符合质量要求即可?
是否可以采用国际物品编码协会(GS1)颁发的UDI去满足MDR的要求?
食品注册过程中可选择哪些机构进行检验?
可利用产品(如不符合粒径的颗粒、压片结束留在轨道上的中间产品、包装形成的次品等)的回收都要进行质量风险评估吗?

推荐内容

我公司有无菌分装的生产线,按GMP要求进行设备验证,环境监测、培养基模拟灌装试验,请问申报新的无菌分装品种时是否可以借鉴已有的验证资料?是否需要单独为申报新品种再做上述验证工作?
在仿制药研发中如何选择质量对比研究用对照药
获准开展药物临床试验的药物增加与其他药物联合用药的,若该药物已经在境内批准上市,是否需同时提出药物临床试验申请?
关于原研原料药难以获得,如何开展仿制原料药与原研原料药的对比研究
中药是否可以在中国上市药品专利信息登记平台进行相关专利登记?
单克隆筛选Fed-batch评估的筛选的依据是什么?
元素杂质在化学元素周期表的分布及引入途径?
在进行灭菌工艺验证时,一般会放置一个校验的探头在灭菌柜控制探头旁边,这两者之间的温度差异有什么要求?是否应按校样标准,只允许±0.5℃的偏差?
某药物原研进口制剂为普通片,国内已有按改剂型注册的口腔崩解片获得批准,若仿制口腔崩解片,药学对比研究是与原研厂普通片对比还是与已上市的口腔崩解片进行对比?
载体至少应具备哪些条件?